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飼料中三聚氰胺的測定
更新時間:2017-06-15   點擊次數:3776次

1 范圍
本標準規定了用液相色譜法(HPLC)和氣相色譜質譜法(GCMS)測定飼料中三聚氰胺的方法。液相色譜法為篩選法,氣相色譜質譜法為確證法。
本標準適用于配合飼料,預混料、濃縮飼料、飼料添加劑、植物性蛋白粉、寵物飼料中三聚氰胺的測定,方法zui低定量限液相色譜法和氣相色譜質譜法分別為2.0mg/kg和0.05mg/kg,液相色譜的zui低檢測濃度分別為0.5mg/kg。
2 規范性引用文件
下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用于本標準,然而,鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的版本。凡是不注日期的引用文件,其版本適用于本標準。
*法 液相色譜法
3 原理
試樣中的三聚氰胺用1%三氯乙酸提取,離心后取部分提取液,用陽離子交換柱凈化,洗脫物用具有二極管陣列檢測器的液相色譜儀進行定量。
4 試劑與材料
除非另有規定,僅使用分析純試劑。水為蒸餾水,色譜用水符合GB/T 6682一級用水的規定。
4.1 甲醇:色譜純。
4.2 乙睛:色譜純。
4.3 氨水。
4.3 陽離子交換柱(SPE柱):60mg,3mL或150mg,6mL。
4.4 1%三氯乙酸:稱取10g三氯乙酸溶解于1000mL水中。
4.5 5%氨化甲醇:量取5mL氨水,溶解于100mL甲醇中。
4.6乙酸鉛溶液(ρ(PbAc2)=22g/L):取22g乙酸鉛用約300mL水溶解后定容至1L。
4.7 m,有機相
m濾膜:0.45
4.8 三聚氰胺標準品(﹥99.0%)
4.9標準儲備液(1mg/mL):稱取100mg(到0.1mg)的標準品,用甲醇/水(2:8,V:V)溶解并定容于100mL容量瓶中。
4.10 標準工作液:標準工作液按照需要逐級稀釋配制。
5 儀器與設備
5.1 液相色譜儀,配有二極管陣列檢測器。
5.2 離心機:10000rpm
5.3 渦旋混合器
5.4 氮吹儀
5.5 固相萃取裝置
5.6 高速勻質器
5.7 索式提取器
6 測定步驟
6.1 提取
6.1.1 植物蛋白和飼料中三聚氰胺的提取
稱取5.0g樣品,準確加入48ml1%的三氯乙酸溶液,加入2mL飽和醋酸鉛溶液。搖勻,超聲提取20min。取提取液約30mL轉入離心管,在10000rpm離心機上離心5min。
6.1.2 寵物飼料中三聚氰胺的提取
稱取5.0g樣品,在索式提取器中用**回流6h去除脂肪。脫脂殘渣準確加入48ml1%的三氯乙酸溶液,加入2mL飽和醋酸鉛溶液。搖勻,超聲提取20min。取提取液約30mL轉入離心管,在10000rpm離心機上離心5min。
6.2 凈化
  m濾膜,濾液用于液相色譜測定。
m MCX柱活化和上樣:分別用3ml甲醇,3ml水活化MCX柱,準確移取10mL離心液分次上柱。再用3ml水和3ml甲醇洗滌MCX柱,抽近干后用5%氨化甲醇溶液(4.5)3ml洗脫。洗脫液于氮吹儀上50℃氮吹至干,用2+8甲醇水定容,過0.45
6.3 測定
6.3.1液相色譜條件
m;
m4.6mm(i.d),5´色譜柱:C8柱,150
柱溫:室溫
流動相:10+90(乙腈:10mM庚烷磺酸鈉,10mM檸檬酸緩沖液)
檢測波長:240nm
L
m進樣量:20
根據試樣中被測物的含量情況,選取響應值適宜的標準工作液進行色譜分析,按照保留時間和二極管陣列的紫外光譜進行定性,標準工作液應有五個濃度水平。標準工作液和待測樣液中三聚氰胺的響應值應在儀器線性響應范圍內。
6.4        結果計算和表述
按照下式計算試樣中三聚氰胺的含量:

式中:
W-試樣中三聚氰胺的含量,單位為毫克每公斤(mg/kg);
V-樣品zui終定容體積,單位為克(g);
g/L);
mc-由標準曲線而得的樣液中三聚氰胺的含量,單位為微克每升(
m-試樣量,單位為克(g)。
n — 稀釋倍數。

6.5 結果表示
平行測定結果用算術平均值表示,結果保留三位有效數字。

7重復性
在同一實驗室由同一操作人員使用同一儀器完成的兩個平行測定的相對偏差不大于10%

氣相色譜-質譜法(確證法)
8 方法提要
試樣中的三聚氰胺用1%三氯乙酸提取,用陽離子交換柱凈化,用BSTFA衍生化,用氣相色譜-質譜進行定性和定量分析。
9 試劑和材料
衍生化試劑:N,O-雙*基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)
其他同5
10 儀器和設備
氣相色譜-質譜,其它同6
11 分析步驟
前處理同6.1和6.2
11.1 衍生化
L的BSTFA,混勻,在70℃衍生30min。同時用三聚氰胺標準系列做同步衍生。
mL的吡啶和200m將6.2的凈化液吹干,加入200
測定
11.2 氣相色譜-質譜條件
柱子:DB-5MS柱
載氣:He 流速: 1.3 ml/min 平均線性速度: 35 cm/sec 壓力: 17.5 psi (initial)模式:恒流
進樣:不分流或分流進樣 (1:20),進樣體積為1µl,進樣溫度: 250ºC
升溫程序:起始溫度為75ºC,持續1.0 min,以30ºC/min升溫至300ºC,保持2.0min。傳輸線溫度為280ºC。
運行時間:  10.5 min
質譜條件:質量范圍: 40-450 amu
掃描模式:全掃描 (Electron Ionization)
溶劑延遲:  4.2 min (splitless); 3.8 min (split)
四極桿: 150ºC
離子源: 230ºC
監測離子:特征離子 171,99,73;分子離子:327,342
11.3 定性定量方法
定性方法:樣品與標準品保留時間的相對標準偏差不大于0.5%。特征離子基峰百分數與標準品相差不大于20%。
定量方法:選擇離子監測(SIM)法計算峰面積,單點或多點校準法定量。
12 結果結算和表述
按照下式計算試樣中三聚氰胺的含量:

式中:
W-試樣中三聚氰胺的含量,單位為毫克每公斤(mg/kg);
V-樣品zui終定容體積,單位為克(g);
g/L);
mc-由標準曲線而得的樣液中三聚氰胺的含量,單位為微克每升(
m-試樣量,單位為克(g)。
平行測定結果用算術平均值表示,結果保留三位有效數字。
13 允許差
取平行測定結果的算術平均值為測定結果,兩個平行測定的相對偏差不大于20%。

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